微生物限度檢查薄膜過(guò)濾法操作規(guī)程
 
一、適用范圍
本規(guī)程適用于純化水、注射用水等水系統(tǒng)及非無(wú)菌制劑的微生物限度檢查，包括細(xì)菌、霉菌及酵母菌的計(jì)數(shù)檢測(cè)。
 
二、操作步驟
1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
環(huán)境要求：在潔凈度10000級(jí)下的局部100級(jí)單向流空氣區(qū)域操作。
器材準(zhǔn)備：
0.45μm孔徑滅菌濾膜（直徑47mm）
營(yíng)養(yǎng)瓊脂、R2A瓊脂等培養(yǎng)基（提前滅菌）
無(wú)菌鑷子、濾杯、真空泵及緩沖液（pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液）
濾膜處理：用純化水浸泡濾膜3-5分鐘，檢查完整性后備用。
 

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2. 過(guò)濾操作
潤(rùn)膜：用緩沖液濕潤(rùn)濾膜，抽濾排除多余液體。
樣品過(guò)濾：
取1-10ml供試液（必要時(shí)稀釋?zhuān)┘尤霝V杯。
啟動(dòng)真空泵，緩慢抽濾至濾膜干燥。
沖洗：用100ml緩沖液沖洗濾膜，去除殘留抑制物。
 
3. 濾膜培養(yǎng)
貼膜：用無(wú)菌鑷子將濾膜菌面朝上貼于培養(yǎng)基平板，避免氣泡。
培養(yǎng)條件：
細(xì)菌：30-35℃培養(yǎng)48-72小時(shí)。
霉菌/酵母菌：23-28℃培養(yǎng)5-7天。
 
4. 結(jié)果觀察
計(jì)數(shù)：使用菌落計(jì)數(shù)器記錄菌落數(shù)，排除異常生長(zhǎng)平板。
報(bào)告：以CFU/ml為單位報(bào)告結(jié)果，若無(wú)菌落生長(zhǎng)則報(bào)告<1。
 

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三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
無(wú)菌操作：全程在生物安全柜或潔凈環(huán)境中進(jìn)行，避免污染。
濾膜完整性：使用前檢查濾膜無(wú)破損，過(guò)濾后確認(rèn)無(wú)泄漏。
陰性對(duì)照：設(shè)置緩沖液陰性對(duì)照，確保無(wú)假陽(yáng)性結(jié)果。
樣品處理：
高菌量樣品需適當(dāng)稀釋。
油性樣品需先干燥濾膜。
設(shè)備維護(hù)：
定期檢查真空泵密封性。
不銹鋼濾杯使用前需更換或重新滅菌。
 
四、異常處理
結(jié)果超標(biāo)：復(fù)查取樣過(guò)程及系統(tǒng)清潔度，檢查濾膜完整性。
過(guò)濾失敗：檢查管路連接、濾杯密封性及濾膜孔徑。
 
五、記錄與驗(yàn)證
記錄過(guò)濾量、培養(yǎng)溫度、菌落形態(tài)等關(guān)鍵數(shù)據(jù)。
定期進(jìn)行方法驗(yàn)證，確保檢測(cè)靈敏度符合要求。

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